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顯微成像·洞察微觀之美
Microscopic imaging, insight into the beauty of micro
不止ImageJ：怎么快速實現徑向熒光強度分析？
發(fā)布時間：2024-08-05
訪問量：3910
熒光強度分析是論文常用技能之一，它可以量化熒光強度，從而進行對比分析或統(tǒng)計分析，得出可信的結果。今天我們就來介紹下如何用明美顯微數碼測量分析系統(tǒng)和ImageJ快速實現徑向熒光強度分析。
近期聚苯乙烯納米顆粒論文中使用的熒光強度分析①
一、能量曲線工具
能量曲線工具在右下角
能量曲線是明美顯微數碼測量分析系統(tǒng)的工具之一，它可以直觀呈現徑向直線上熒光強度變化，具有方便易用，結果直觀的優(yōu)點。
能量曲線使用效果
能量曲線使用非常簡單，選中工具后可以在成像窗口或圖片上畫線，然后系統(tǒng)就會在線上生成一個曲線圖，紅藍綠三色熒光分別呈現為紅藍綠三色曲線。曲線圖以用戶畫的線為X軸，以光強為Y軸，Y軸有100%和50%兩條線，可快速估算熒光強度。
紅色熒光上使用效果
能量曲線在單色熒光中，可用于快速判斷熒光強度，從而進行對比獲得科研靈感，或用于曝光控制，避免ROI的目標過度曝光導致重要的細節(jié)信息丟失。而在多色熒光中，能量曲線還可以用于快速判斷熒光共定位情況。
二、ImageJ/FIJI量化分析
FIJI直線工具
能量曲線方便易用，直觀快速但不夠量化，要更量化地進行徑向熒光強度分析，需要用到ImageJ或者說FIJI（JIFI是更新版的ImageJ）.首先打開熒光圖片，使用直線工具畫線，注意畫線對比時長度數據要一致。
轉換為8bit圖像
我們這個熒光圖是單色熒光，因此我們這里先將其轉化成8bit格式，減少其他通道信號可能帶來的問題，在菜單選項選擇Image-Type-8bit.
打開Plot Profile
下一步打開Plot Profile，可以從菜單Analyze-Plot Profile打開，也可以直接按鍵盤的K鍵打開，打開后會呈現直線光強的曲線圖。
保存數據
點擊曲線圖窗口的Data-Save Data，可以將數據導出成CSV格式，然后就可以用Excel或者Origin之類工具打開進行后續(xù)的數據統(tǒng)計分析或者曲線圖繪制了。
復制全部數據
除了Data-Save Data導出成文件以外，還能使用Data-Copy All Data將數據復制到剪切板，然后直接在已經打開的Excel中進行粘貼，減少保存多個數據文件的麻煩。
Excel中曲線圖繪制
一個小提醒，如果想在Excel里做出像上面論文的圖片，可能還需要經過數據處理，前列是像素，需要根據軟件標尺換算成尺寸，通常是μm；后列是熒光強度，因為數據是8bit的，因此數值是0-255，按255為100%做個換算來畫Y軸。
今天的文章分享就到這里，希望對大家的日常工作有幫助，如您有想了解的使用技巧，也歡迎向我們提出。
引用文獻：
①Sun, H., Yang, B., Li, Q. et al. Polystyrene nanoparticles trigger aberrant condensation of TDP-43 and amyotrophic lateral sclerosis-like symptoms. Nat. Nanotechnol. (2024). https://doi.org/10.1038/s41565-024-01683-5
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